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基因应用:鸽子性别鉴定(唾液法)

家鸽性别鉴定专用试剂盒使用说明书

 

试剂盒规格

 100个反应    200个反应    500个反应    1000 个反应   2000 个反应  

5000个反应

 赠品

试剂盒成分

1、A液 (室温条件下储藏)

2、B液 (4oC储藏)

3、C液 (-20oC储藏)

4、D液 (室温储藏)

5、琼脂糖

6、E液(室温储藏,避光)

保质期:暂定4个月

 

使用说明书

1、家鸽基因组DNA模板的制备(血液法)

1.1 按需要进行性别鉴定的鸽子数,准备相应的1.5ml EP管个数。

1.2用100l移液器在每个EP管中分别加入20l A液。

1.3 在鸽子翅膀的腹侧静脉丰富处用大头针刺破静脉,出血后,用2.5l移液器吸取1l血液(注意如果吸头外沾有血液外需要用吸水纸吸去,确保取样量准确),移入每个EP管中,加样时以接触到A液的液面为准。弃去枪头。吸取新的样本时请注意更换枪头。合上EP管盖子后,在EP管上用记号笔写上相应鸽子的编号,然后立即将样品放在自制的冰上。

注意:在采集下一只鸽子时,请更换大头针。大头针经过自来水清洗处理,晾干后可重复使用。

1.4采集完后,将盛有血样的EP管放入预热的95摄氏度水浴锅中,热激10分钟。

1.5 用10l移液器将10l B液移入新的8联PCR管内。

1.6 用2.5l移液器逐一从1.3中准备好的含血液的1.5ml EP管中吸取1l稀释的血液分别放入8联PCR管内,加样时以接触到B液液面为准。弃去吸头。吸取新的样本时请注意更换枪头。然后对8联PCR管做好相应标记,以对应相应的鸽子编号。

1.7 将PCR管盖上盖上后放入PCR仪,按以下程序进行孵育:65oC 30分钟、95oC 5分钟、16oC 1分钟。

2、家鸽性别特异性基因扩增

2.1 取用新的PCR 8联管(96孔PCR板),按上述方式编号,然后用10l移液器在每管内分别加入9.5 l C 液;

2.2 用2.5l移液器从1.7中的8联 PCR管内分别吸取0.5 l溶液,加入对应的已加有C液的管内,然后盖上PCR管盖。吸取新的样本时请注意更换枪头。

2.3 离心30秒钟,将溶液都离心到PCR 8联管底部

2.4 将8联管(或PCR板)分别按顺序依次放入PCR仪器内,按以下程序进行性别特异基因扩增:

95 oC 2 min

35  (95 oC 30 s, 56oC 30s, 72oC 40 s)

72 oC 10 min

16oC 储存

3、电泳检测

3.1 用电子天平秤取0.6克琼脂糖,倒入100 ml三角烧瓶内, 加入60 ml D液;然后放入微波炉内加热煮沸;待琼脂糖溶解后,放室温下冷却至60 oC,加入3 l E 液,混匀后倒入凝胶制备板内,插上样品梳。室温冷却30分钟。

3.2 拨去样品梳。用10l移液器吸取PCR扩增好的产品5 l 分别加入琼脂糖凝胶的样品孔内。

3.3 在充满D液(可重复使用)的电泳槽内,以电压120V,电泳13分钟。

3.4 在紫外透射台下进行观察记录。

4、性别判定

   出现两个电泳条带(其中较小电泳条带较强,而较大条带的较弱)的样品对应的鸽子为雌性(如下图标有F的为雌鸽),仅出现较大条带对应的鸽子为雄性。如果未出现上述两种条带,则或者因为DNA模板制备出问题、或者PCR扩增时样品因PCR管盖子未盖紧样品挥发干而造成,需要对该样品重新进行鉴定。

 

 

图一、鸽子性别鉴定结果电泳图。 标有F泳道对应的鸽子为雌性。其余为雄性。

 

 

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